带来一份超实用的实验攻略——免疫共沉淀（Co-IP）。这可是研究蛋白相互作用的必备技能！
📝 Co-IP 简介
免疫共沉淀（Co-IP）是一种研究蛋白质相互作用的技术。它通过特异性抗体结合目标蛋白，再利用磁珠或琼脂糖沉淀复合物，从而捕获与目标蛋白相互作用的蛋白。简单来说，就是“揪出”和目标蛋白“手拉手”的蛋白。
🔬 实验步骤：手把手教你做 Co-IP
1️⃣ 细胞裂解
关键点：使用温和的 NP40 裂解液，避免破坏蛋白相互作用。
操作：将含有目标蛋白的细胞裂解，得到裂解液。
2️⃣ 免疫沉淀
关键点：选择特异性抗体，并将其固定在磁珠或琼脂糖上。
操作：将裂解液与抗体结合，形成抗体-蛋白复合物。
3️⃣ 沉淀目标蛋白
关键点：使用蛋白 A/G 磁珠或琼脂糖，确保沉淀效果。
操作：加入磁珠，沉淀抗体-蛋白复合物。
4️⃣ 洗涤
关键点：彻底去除非特异性结合的蛋白，减少背景。
操作：用预冷的 PBS 洗涤磁珠，重复 3 次。
5️⃣ 分离并检测
关键点：选择合适的检测方法，如 Western blot 或质谱。
操作：将沉淀的蛋白溶解后进行检测。
🛒 主要耗材
磁珠：推荐天津诺一生物的磁珠，性能超棒，已连接抗体，方便快捷。
磁力架：Invitrogen 的产品，价格稍高，但耐用且方便，性价比高。
📝 Co-IP 详细步骤
✅共表达蛋白：利用细胞共同过表达两个互作蛋白，分别携带 flag、HA、Myc 等不同标签。
✅裂解细胞：过表达后 48-72 小时，用 NP40 裂解液提取细胞蛋白。
✅准备磁珠：将磁珠用 PBS 清洗两次，去除杂质。
✅孵育：加入细胞裂解液蛋白，4°C 孵育 6 小时或过夜。
✅洗涤：用 PBS 洗涤磁珠 3 次，去除杂质。
✅洗脱蛋白：加入 Loading buffer，煮沸，保留上清液作为蛋白样品。
✅检测：Western blot 检测时，参考文献顺序点样，避免浪费。
🎯 小贴士
⭕️裂解液选择：NP40 裂解液温和，能更好地保留蛋白相互作用。
⭕️孵育时间：4°C 孵育时间要足够长，让抗体和蛋白充分结合。
⭕️洗涤彻底：洗涤步骤不能马虎，确保去除杂质，减少背景。