一、qPCR是啥？和普通PCR有啥区别？🤔
普通PCR：只能告诉你“有没有目标DNA”（定性）。
qPCR：不仅能定性，还能定量告诉你“有多少目标DNA”🎯！
关键技能：实时监测DNA扩增，用荧光信号推算初始浓度
二、必懂名词解释！🔍
1️⃣ Ct值（Threshold Cycle）
👉 定义：荧光信号达到阈值所需的循环数。
👉 口诀：Ct值小=目标多（比如Ct=20比Ct=30浓度高10倍！）💡
2️⃣ 荧光探针/染料
SYBR Green🌿：绑定双链DNA就发光，便宜但可能“乱报”（非特异结合）。
TaqMan探针🔦：精准识别目标DNA才发光，贵但靠谱！
3️⃣ 熔解曲线📉
👉 用途：验货！单一峰=产物纯，杂峰=有“假货”（非特异扩增）。
4️⃣ 内参基因（如GAPDH、β-actin）
👉 作用：当“标尺”📏，消除样本差异（比如RNA提取量不同）。
三、操作流程⚙️
备样本：提DNA/RNA（测RNA需反转录成cDNA）。
配试剂：加引物、探针、酶、模板，摇匀！🧪
上机跑程序：
变性（95℃🔥）：拆开DNA双链。
退火（60℃❄️）：引物精准配对目标序列。
延伸（72℃🌡️）：合成新DNA链。
每个循环采荧光💡！
数据分析📊：用Ct值+标准曲线算浓度。
四、应用领域超广！🌐
医学：新冠检测🦠、HPV筛查、癌症基因诊断。
科研：比较基因表达差异（比如药物处理vs对照组🔬）。
农业：检测转基因成分🌽。
环境：追踪水源中的致病菌💧！
五、避坑指南❗
阴性对照🚫：不加模板，排查污染！
阳性对照✅：加已知目标DNA，验证实验有效。
Ct值异常高？🤯：可能样本浓度太低，或试剂有抑制物！
假阳性👻：优化引物设计+严格分区操作（样本vs试剂分开）。
总结🎉
qPCR=灵敏度高+定量准，是分子生物学的“扛把子”！掌握Ct值、熔解曲线、内参基因，实验数据更靠谱～ 看完这篇，你也能和qPCR愉快玩耍啦！🚀
普通PCR：只能告诉你“有没有目标DNA”（定性）。
qPCR：不仅能定性，还能定量告诉你“有多少目标DNA”🎯！
关键技能：实时监测DNA扩增，用荧光信号推算初始浓度
二、必懂名词解释！🔍
1️⃣ Ct值（Threshold Cycle）
👉 定义：荧光信号达到阈值所需的循环数。
👉 口诀：Ct值小=目标多（比如Ct=20比Ct=30浓度高10倍！）💡
2️⃣ 荧光探针/染料
SYBR Green🌿：绑定双链DNA就发光，便宜但可能“乱报”（非特异结合）。
TaqMan探针🔦：精准识别目标DNA才发光，贵但靠谱！
3️⃣ 熔解曲线📉
👉 用途：验货！单一峰=产物纯，杂峰=有“假货”（非特异扩增）。
4️⃣ 内参基因（如GAPDH、β-actin）
👉 作用：当“标尺”📏，消除样本差异（比如RNA提取量不同）。
三、操作流程⚙️
备样本：提DNA/RNA（测RNA需反转录成cDNA）。
配试剂：加引物、探针、酶、模板，摇匀！🧪
上机跑程序：
变性（95℃🔥）：拆开DNA双链。
退火（60℃❄️）：引物精准配对目标序列。
延伸（72℃🌡️）：合成新DNA链。
每个循环采荧光💡！
数据分析📊：用Ct值+标准曲线算浓度。
四、应用领域超广！🌐
医学：新冠检测🦠、HPV筛查、癌症基因诊断。
科研：比较基因表达差异（比如药物处理vs对照组🔬）。
农业：检测转基因成分🌽。
环境：追踪水源中的致病菌💧！
五、避坑指南❗
阴性对照🚫：不加模板，排查污染！
阳性对照✅：加已知目标DNA，验证实验有效。
Ct值异常高？🤯：可能样本浓度太低，或试剂有抑制物！
假阳性👻：优化引物设计+严格分区操作（样本vs试剂分开）。
总结🎉
qPCR=灵敏度高+定量准，是分子生物学的“扛把子”！掌握Ct值、熔解曲线、内参基因，实验数据更靠谱～ 看完这篇，你也能和qPCR愉快玩耍啦！🚀
